Téměř každý list produktu uvádí čistotu v procentech. Toto číslo je užitečné, pokud víte, co bylo měřeno.
Jak se čistota měří
Standardní metodou je HPLC. Rozpuštěný vzorek prochází kolonou, která oddělí jeho složky. Detektor měří, kolik světla jednotlivé složky absorbují, obvykle při vlnové délce přibližně 214 až 220 nanometrů, kde absorbuje vazba mezi aminokyselinami.
Výsledkem je chromatogram: čára s píky. Čistota je plocha hlavního píku vydělená plochou všech píků dohromady. Při čistotě 99 % tedy 1 % signálu pochází z něčeho jiného.
Co je to „něco jiného“
Nečistoty v syntetickém peptidu se často velmi podobají samotnému produktu:
- řetězce, kterým chybí jedna aminokyselina;
- zkrácené řetězce;
- oxidované nebo deamidované varianty;
- zbytky chránicích skupin ze syntézy.
Právě proto, že se produktu podobají, mohou být v experimentu také aktivní. Nižší čistota znamená větší nejistotu ohledně toho, co způsobuje naměřený účinek.
Co číslo neříká
Kolik peptidu je v lahvičce
Lyofilizovaný prášek se neskládá pouze z peptidu. Obsahuje také protiionty, například acetát, a trochu vázané vody. Podíl samotného peptidu se nazývá obsah peptidu a obvykle činí 70 až 90 hmotnostních procent. Prášek tak může mít čistotu 99 % a obsahovat 80 % peptidu. Jedno číslo popisuje složení peptidu, druhé složení prášku.
O jakou sloučeninu jde
HPLC ukazuje, že je přítomna jedna hlavní složka, nikoli o jakou složku jde. K tomu je zapotřebí hmotnostní spektrometrie. Proto čistota a identita patří společně do certifikátu analýzy.
Nic o sterilitě ani endotoxinech
Chromatogram nezachytí bakterie ani endotoxiny. To jsou samostatné testy.
Porovnávání čísel
Výsledek závisí na metodě. Krátký běh se strmým gradientem odděluje hůře než dlouhý a může nečistotu skrýt pod hlavním píkem. Procenta proto porovnávejte pouze tehdy, když znáte podmínky měření, a prohlédněte si samotný chromatogram.
Kdy na čistotě 99 % záleží
Pro kvalitativní experiment často postačí 95 %. Pro kvantitativní práci, jako je křivka závislosti odpovědi na dávce v buněčném modelu nebo vazebný test, chcete co nejméně rušivých faktorů. V takovém případě není vysoká čistota luxusem.
U PulseChem se šarže uvolňuje při čistotě stanovené metodou HPLC ≥ 99 %. Naměřená hodnota pro vaši šarži je uvedena v jejím certifikátu, který najdete na stránce Výsledky analýz. Viz také laboratorní standard.
Tento článek poskytuje základní informace o laboratorním výzkumu. Nejde o lékařskou radu ani o návod k použití. Všechny produkty jsou určeny výhradně pro výzkumné účely.