Casi todas las fichas de producto indican un porcentaje de pureza. La cifra es útil, siempre que sepa qué se ha medido.
Cómo se mide la pureza
El método estándar es la HPLC. Una muestra disuelta pasa por una columna que separa sus componentes. Un detector mide cuánta luz absorbe cada componente, normalmente a una longitud de onda de unos 214 a 220 nanómetros, donde absorbe el enlace entre aminoácidos.
El resultado es un cromatograma: una línea con picos. La pureza es el área del pico principal dividida entre el área de todos los picos juntos. Con un 99 %, por tanto, el 1 % de la señal procede de otra cosa.
Qué es esa «otra cosa»
Las impurezas de un péptido sintético suelen parecerse mucho al propio producto:
- cadenas a las que les falta un aminoácido;
- cadenas truncadas;
- variantes oxidadas o desamidadas;
- restos de grupos protectores de la síntesis.
Precisamente porque se parecen al producto, también pueden ser activas en un experimento. Una pureza menor implica más incertidumbre sobre qué origina el resultado de una medición.
Qué no dice la cifra
No dice cuánto péptido hay en el vial
Un polvo liofilizado no se compone solo de péptido. También contiene contraiones, como el acetato, y un poco de agua ligada. La proporción de péptido real se denomina contenido peptídico y suele situarse entre el 70 y el 90 por ciento en peso. Por tanto, un polvo puede tener una pureza del 99 % y contener un 80 % de péptido. Una cifra describe la composición del péptido; la otra, la composición del polvo.
No dice qué compuesto es
La HPLC muestra que hay un componente principal, no qué componente es. Para saberlo hace falta la espectrometría de masas. Por eso la pureza y la identidad van juntas en un certificado de análisis.
No dice nada sobre esterilidad ni endotoxinas
Un cromatograma no detecta bacterias ni endotoxinas. Esos son análisis aparte.
Comparar cifras
El resultado depende del método. Una medición corta con un gradiente pronunciado separa peor que una larga y puede ocultar una impureza bajo el pico principal. Por eso, compare solo porcentajes cuyas condiciones de medición conozca y fíjese en el propio cromatograma.
Cuándo importa el 99 %
Para un experimento cualitativo, un 95 % suele bastar. Para el trabajo cuantitativo, como una curva dosis-respuesta en un modelo celular o un ensayo de unión, interesa tener el menor número posible de factores de confusión. En ese caso, una pureza alta no es un lujo.
En PulseChem, un lote se libera con una pureza por HPLC de ≥ 99 %. El valor medido de su lote figura en el certificado correspondiente, que encontrará en la página Resultados de laboratorio. Consulte también el estándar de laboratorio.
Este artículo contiene información de contexto sobre la investigación de laboratorio. No es asesoramiento médico ni son instrucciones de uso. Todos los productos son exclusivamente para investigación.