Presque toutes les fiches produit indiquent un pourcentage de pureté. Ce chiffre est utile, à condition de savoir ce qui a été mesuré.
Comment la pureté est mesurée
La méthode standard est l’HPLC. Un échantillon dissous traverse une colonne qui sépare ses constituants. Un détecteur mesure la quantité de lumière absorbée par chaque constituant, généralement à une longueur d’onde d’environ 214 à 220 nanomètres, à laquelle la liaison entre acides aminés absorbe.
Le résultat est un chromatogramme : une ligne présentant des pics. La pureté est l’aire du pic principal divisée par l’aire de l’ensemble des pics. À 99 %, 1 % du signal provient donc d’autre chose.
Ce qu’est cet « autre chose »
Les impuretés d’un peptide de synthèse ressemblent souvent beaucoup au produit lui-même :
- des chaînes auxquelles il manque un acide aminé ;
- des chaînes tronquées ;
- des variants oxydés ou désamidés ;
- des restes de groupes protecteurs issus de la synthèse.
C’est précisément parce qu’elles ressemblent au produit qu’elles peuvent aussi être actives dans une expérience. Une pureté plus faible signifie davantage d’incertitude sur l’origine d’un effet mesuré.
Ce que ce chiffre ne dit pas
Pas la quantité de peptide contenue dans le flacon
Une poudre lyophilisée ne se compose pas uniquement de peptide. Elle contient aussi des contre-ions, comme l’acétate, et un peu d’eau liée. La part de peptide proprement dit s’appelle la teneur en peptide et se situe généralement entre 70 et 90 pour cent du poids. Une poudre peut donc être pure à 99 % et contenir 80 % de peptide. L’un des chiffres décrit la composition du peptide, l’autre celle de la poudre.
Pas l’identité du composé
L’HPLC montre qu’il y a un constituant principal, mais pas ce qu’est ce constituant. Pour cela, il faut la spectrométrie de masse. C’est pourquoi pureté et identité vont de pair sur un certificat d’analyse.
Rien sur la stérilité ni sur les endotoxines
Un chromatogramme ne détecte ni les bactéries ni les endotoxines. Il s’agit de tests distincts.
Comparer les chiffres
Le résultat dépend de la méthode. Une analyse courte avec un gradient à forte pente sépare moins bien qu’une analyse longue et peut masquer une impureté sous le pic principal. Ne comparez donc des pourcentages que si vous connaissez les conditions de mesure, et examinez le chromatogramme lui-même.
Quand les 99 % comptent
Pour une expérience qualitative, 95 % suffisent souvent. Pour un travail quantitatif, comme une courbe dose-réponse dans un modèle cellulaire ou un essai de liaison, vous souhaitez aussi peu de facteurs de confusion que possible. Dans ce cas, une pureté élevée n’est pas un luxe.
Chez PulseChem, un lot est libéré lorsque sa pureté par HPLC est ≥ 99 %. La valeur mesurée pour votre lot figure sur son certificat, que vous trouverez sur la page Résultats d’analyse. Consultez également le standard de laboratoire.
Cet article fournit des informations générales sur la recherche en laboratoire. Il ne s’agit ni d’un avis médical ni d’un mode d’emploi. Tous les produits sont destinés exclusivement à la recherche.