Niemal każda karta produktu podaje procent czystości. Ta liczba jest przydatna, pod warunkiem że wiadomo, co zmierzono.
Jak mierzy się czystość
Metodą standardową jest HPLC. Rozpuszczona próbka przechodzi przez kolumnę, która rozdziela jej składniki. Detektor mierzy, ile światła pochłania każdy składnik, zwykle przy długości fali około 214–220 nanometrów, przy której pochłania wiązanie między aminokwasami.
Wynikiem jest chromatogram: linia z pikami. Czystość to pole powierzchni głównego piku podzielone przez łączne pole powierzchni wszystkich pików. Przy 99% zatem 1% sygnału pochodzi od czegoś innego.
Czym jest to „coś innego”
Zanieczyszczenia peptydu syntetycznego często bardzo przypominają sam produkt:
- łańcuchy, w których brakuje jednego aminokwasu;
- skrócone łańcuchy;
- warianty utlenione lub deamidowane;
- pozostałości grup ochronnych z syntezy.
Właśnie dlatego, że przypominają produkt, mogą być również aktywne w eksperymencie. Niższa czystość oznacza większą niepewność co do tego, co wywołuje zmierzony efekt.
Czego ta liczba nie mówi
Nie mówi, ile peptydu jest w fiolce
Liofilizowany proszek nie składa się wyłącznie z peptydu. Zawiera również przeciwjony, takie jak octan, oraz niewielką ilość związanej wody. Udział właściwego peptydu nazywa się zawartością peptydu i wynosi zwykle od 70 do 90 procent masowych. Proszek może więc mieć czystość 99% i zawierać 80% peptydu. Jedna liczba opisuje skład peptydu, druga skład proszku.
Nie mówi, jaki to związek
HPLC pokazuje, że występuje jeden główny składnik, ale nie to, czym ten składnik jest. Do tego potrzebna jest spektrometria mas. Dlatego czystość i tożsamość powinny występować razem w certyfikacie analizy.
Nic o sterylności ani endotoksynach
Chromatogram nie wykrywa bakterii ani endotoksyn. Służą do tego odrębne badania.
Porównywanie wartości
Wynik zależy od metody. Krótki przebieg ze stromym gradientem rozdziela gorzej niż długi i może ukryć zanieczyszczenie pod głównym pikiem. Wartości procentowe należy więc porównywać tylko wtedy, gdy znane są warunki pomiaru, i warto obejrzeć sam chromatogram.
Kiedy 99% ma znaczenie
Do eksperymentu jakościowego często wystarcza 95%. W pracy ilościowej, takiej jak krzywa dawka-odpowiedź w modelu komórkowym lub test wiązania, pożądana jest jak najmniejsza liczba czynników zakłócających. W takim przypadku wysoka czystość nie jest luksusem.
W sklepie PulseChem partia jest dopuszczana przy czystości HPLC ≥99%. Zmierzona wartość dla danej partii znajduje się w jej certyfikacie, dostępnym na stronie Wyniki analiz. Zob. również standard laboratoryjny.
Ten artykuł zawiera informacje ogólne na temat badań laboratoryjnych. Nie stanowi porady medycznej ani instrukcji użycia. Wszystkie produkty są przeznaczone wyłącznie do celów badawczych.