Quase todas as fichas de produto indicam uma percentagem de pureza. O número é útil, desde que se saiba o que foi medido.
Como se mede a pureza
O método padrão é a HPLC. Uma amostra dissolvida atravessa uma coluna que separa os seus componentes. Um detetor mede a quantidade de luz que cada componente absorve, normalmente a um comprimento de onda de cerca de 214 a 220 nanómetros, no qual a ligação entre aminoácidos absorve.
O resultado é um cromatograma: uma linha com picos. A pureza é a área do pico principal dividida pela área de todos os picos em conjunto. A 99%, portanto, 1% do sinal provém de outra coisa.
O que é essa «outra coisa»
As impurezas de um péptido sintético assemelham-se muitas vezes ao próprio produto:
- cadeias a que falta um aminoácido;
- cadeias truncadas;
- variantes oxidadas ou desamidadas;
- restos de grupos protetores da síntese.
Precisamente por se assemelharem ao produto, também podem ser ativas numa experiência. Uma pureza mais baixa significa mais incerteza sobre a causa de um efeito medido.
O que o número não diz
Não diz quanto péptido está no frasco
Um pó liofilizado não é constituído apenas por péptido. Contém também contraiões, como o acetato, e um pouco de água ligada. A proporção de péptido efetivo chama-se teor de péptido e situa-se normalmente entre 70 e 90 por cento em peso. Um pó pode, portanto, ter uma pureza de 99% e conter 80% de péptido. Um número descreve a composição do péptido, o outro a composição do pó.
Não diz de que composto se trata
A HPLC mostra que existe um componente principal, não o que esse componente é. Para isso é necessária a espectrometria de massa. É por isso que a pureza e a identidade aparecem juntas num certificado de análise.
Nada diz sobre esterilidade ou endotoxinas
Um cromatograma não deteta bactérias nem endotoxinas. São análises separadas.
Comparar números
O resultado depende do método. Uma corrida curta com um gradiente acentuado separa menos bem do que uma longa e pode esconder uma impureza sob o pico principal. Por isso, só compare percentagens quando conhecer as condições de medição, e observe o próprio cromatograma.
Quando 99% é importante
Para uma experiência qualitativa, 95% é muitas vezes suficiente. Para trabalho quantitativo, como uma curva dose-resposta num modelo celular ou um ensaio de ligação, convém ter o menor número possível de fatores de interferência. Nesse caso, uma pureza elevada não é um luxo.
Em PulseChem, um lote é libertado com uma pureza por HPLC ≥99%. O valor medido para o seu lote consta do respetivo certificado, que pode encontrar na página Resultados laboratoriais. Consulte também o padrão laboratorial.
Este artigo contém informação de contexto sobre investigação laboratorial. Não constitui aconselhamento médico nem instruções de utilização. Todos os produtos se destinam exclusivamente a investigação.