Aproape fiecare fișă de produs indică un procent de puritate. Cifra este utilă, cu condiția să știți ce s-a măsurat.
Cum se măsoară puritatea
Metoda standard este HPLC. O probă dizolvată trece printr-o coloană care îi separă componentele. Un detector măsoară câtă lumină absoarbe fiecare componentă, de obicei la o lungime de undă de aproximativ 214 până la 220 de nanometri, unde absoarbe legătura dintre aminoacizi.
Rezultatul este o cromatogramă: o linie cu vârfuri. Puritatea este aria vârfului principal împărțită la aria tuturor vârfurilor la un loc. La 99 %, așadar, 1 % din semnal provine de la altceva.
Ce este acest „altceva”
Impuritățile dintr-o peptidă sintetică seamănă adesea mult cu produsul însuși:
- lanțuri cărora le lipsește un aminoacid;
- lanțuri trunchiate;
- variante oxidate sau dezamidate;
- resturi de grupări protectoare din sinteză.
Tocmai pentru că seamănă cu produsul, pot fi și ele active într-un experiment. O puritate mai mică înseamnă mai multă incertitudine cu privire la cauza unui efect măsurat.
Ce nu vă spune cifra
Nu câtă peptidă se află în flacon
O pulbere liofilizată nu este formată doar din peptidă. Ea conține și contraioni, precum acetatul, și puțină apă legată. Ponderea peptidei propriu-zise se numește conținut de peptidă și se situează de obicei între 70 și 90 la sută din masă. O pulbere poate deci să fie pură în proporție de 99 % și să conțină 80 % peptidă. O cifră descrie compoziția peptidei, cealaltă compoziția pulberii.
Nu despre ce compus este vorba
HPLC arată că există o singură componentă principală, nu ce este această componentă. Pentru aceasta este nevoie de spectrometrie de masă. De aceea puritatea și identitatea apar împreună într-un certificat de analiză.
Nimic despre sterilitate sau endotoxine
O cromatogramă nu detectează bacterii sau endotoxine. Acestea sunt teste separate.
Compararea cifrelor
Rezultatul depinde de metodă. O analiză scurtă cu un gradient abrupt separă mai slab decât una lungă și poate ascunde o impuritate sub vârful principal. Comparați deci procentele numai atunci când cunoașteți condițiile de măsurare și uitați-vă la cromatograma propriu-zisă.
Când contează 99 %
Pentru un experiment calitativ, 95 % este adesea suficient. Pentru lucrări cantitative, precum o curbă doză-răspuns într-un model celular sau un test de legare, doriți cât mai puțini factori de confuzie. În acest caz, o puritate ridicată nu este un lux.
La PulseChem, un lot se eliberează la o puritate HPLC de ≥ 99 %. Valoarea măsurată pentru lotul dumneavoastră figurează în certificatul acestuia, pe care îl găsiți pe pagina Rezultate de laborator. Consultați și standardul de laborator.
Acest articol oferă informații de context despre cercetarea de laborator. Nu reprezintă un sfat medical și nici instrucțiuni de utilizare. Toate produsele sunt destinate exclusiv cercetării.