Quasi ogni scheda prodotto riporta una percentuale di purezza. Il valore è utile, purché si sappia che cosa è stato misurato.
Come si misura la purezza
Il metodo standard è l’HPLC. Un campione in soluzione attraversa una colonna che ne separa i componenti. Un rivelatore misura quanta luce assorbe ciascun componente, di norma a una lunghezza d’onda compresa tra circa 214 e 220 nanometri, dove assorbe il legame tra gli amminoacidi.
Il risultato è un cromatogramma: una linea con dei picchi. La purezza è l’area del picco principale divisa per l’area di tutti i picchi insieme. Con il 99%, quindi, l’1% del segnale proviene da qualcos’altro.
Che cos’è quel «qualcos’altro»
Le impurezze di un peptide sintetico assomigliano spesso molto al prodotto stesso:
- catene a cui manca un amminoacido;
- catene troncate;
- varianti ossidate o deamidate;
- residui di gruppi protettori della sintesi.
Proprio perché assomigliano al prodotto, possono anche essere attive in un esperimento. Una purezza inferiore significa maggiore incertezza su che cosa provochi un effetto misurato.
Che cosa non dice questo valore
Non dice quanto peptide c’è nel flaconcino
Una polvere liofilizzata non è costituita solo da peptide. Contiene anche controioni, come l’acetato, e un po’ di acqua legata. La quota di peptide effettivo si chiama contenuto peptidico e si colloca tipicamente tra il 70 e il 90 per cento in peso. Una polvere può quindi avere una purezza del 99% e contenere l’80% di peptide. Un valore descrive la composizione del peptide, l’altro la composizione della polvere.
Non dice di quale composto si tratti
L’HPLC mostra che c’è un componente principale, non quale sia. Per questo serve la spettrometria di massa. Ecco perché purezza e identità compaiono insieme su un certificato di analisi.
Non dice nulla su sterilità o endotossine
Un cromatogramma non rileva batteri né endotossine. Sono analisi separate.
Confrontare i valori
Il risultato dipende dal metodo. Una corsa breve con un gradiente ripido separa meno bene di una lunga e può nascondere un’impurezza sotto il picco principale. Confronti quindi le percentuali solo quando conosce le condizioni di misura, ed esamini il cromatogramma stesso.
Quando il 99% è importante
Per un esperimento qualitativo il 95% è spesso sufficiente. Per un lavoro quantitativo, come una curva dose-risposta in un modello cellulare o un saggio di legame, si vogliono il minor numero possibile di fattori di confondimento. In tal caso un’elevata purezza non è un lusso.
Presso PulseChem un lotto viene rilasciato quando la purezza mediante HPLC è ≥99%. Il valore misurato per il suo lotto si trova sul relativo certificato, che può consultare nella pagina Risultati di laboratorio. Veda anche lo standard di laboratorio.
Questo articolo fornisce informazioni di contesto sulla ricerca di laboratorio. Non costituisce una consulenza medica né istruzioni per l’uso. Tutti i prodotti sono destinati esclusivamente alla ricerca.