Lähes jokaisessa tuotekuvauksessa ilmoitetaan puhtausprosentti. Luku on hyödyllinen, kunhan tiedät, mitä on mitattu.
Miten puhtaus mitataan
Vakiomenetelmä on HPLC. Liuotettu näyte kulkee kolonnin läpi, joka erottelee sen komponentit. Detektori mittaa, kuinka paljon valoa kukin komponentti absorboi, yleensä noin 214–220 nanometrin aallonpituudella, jolla aminohappojen välinen sidos absorboi.
Tuloksena on kromatogrammi: viiva, jossa on piikkejä. Puhtaus on pääpiikin pinta-ala jaettuna kaikkien piikkien yhteenlasketulla pinta-alalla. Kun puhtaus on 99 %, 1 % signaalista tulee siis jostakin muusta.
Mitä tuo ”jokin muu” on
Synteettisen peptidin epäpuhtaudet muistuttavat usein läheisesti itse tuotetta:
- ketjut, joista puuttuu yksi aminohappo;
- katkenneet ketjut;
- hapettuneet tai deamidoituneet muodot;
- synteesin suojaryhmien jäämät.
Juuri koska ne muistuttavat tuotetta, ne voivat myös olla aktiivisia kokeessa. Alempi puhtaus tarkoittaa suurempaa epävarmuutta siitä, mikä aiheuttaa mitatun vaikutuksen.
Mitä luku ei kerro
Ei sitä, kuinka paljon peptidiä pullossa on
Lyofilisoitu jauhe ei koostu pelkästä peptidistä. Se sisältää myös vastaioneja, kuten asetaattia, ja hieman sitoutunutta vettä. Varsinaisen peptidin osuutta kutsutaan peptidipitoisuudeksi, ja se on tyypillisesti 70–90 painoprosenttia. Jauhe voi siis olla puhtaudeltaan 99 % ja sisältää 80 % peptidiä. Toinen luku kuvaa peptidin koostumusta, toinen jauheen koostumusta.
Ei sitä, mikä yhdiste on kyseessä
HPLC osoittaa, että pääkomponentteja on yksi, mutta ei sitä, mikä tuo komponentti on. Siihen tarvitaan massaspektrometriaa. Siksi puhtaus ja identiteetti kuuluvat yhdessä analyysitodistukseen.
Ei mitään steriiliydestä tai endotoksiineista
Kromatogrammi ei havaitse bakteereja eikä endotoksiineja. Ne ovat erillisiä testejä.
Lukujen vertailu
Tulos riippuu menetelmästä. Lyhyt ajo jyrkällä gradientilla erottelee huonommin kuin pitkä ajo, ja se voi kätkeä epäpuhtauden pääpiikin alle. Vertaa siis prosentteja vain, kun tiedät mittausolosuhteet, ja katso itse kromatogrammia.
Milloin 99 % on tärkeä
Kvalitatiiviseen kokeeseen 95 % riittää usein. Kvantitatiivisessa työssä, kuten annos-vastekäyrässä solumallissa tai sitoutumismäärityksessä, sekoittavia tekijöitä halutaan mahdollisimman vähän. Silloin korkea puhtaus ei ole ylellisyyttä.
PulseChem vapauttaa erän, kun sen HPLC:llä mitattu puhtaus on ≥ 99 %. Erällesi mitattu arvo on sen analyysitodistuksessa, jonka löydät Analyysitulokset-sivulta. Katso myös laboratoriostandardi.
Tämä artikkeli on taustatietoa laboratoriotutkimuksesta. Se ei ole lääketieteellistä neuvontaa eikä käyttöohje. Kaikki tuotteet on tarkoitettu ainoastaan tutkimuskäyttöön.