Szinte minden termékadatlapon szerepel egy tisztasági százalék. A szám hasznos, feltéve, hogy tudja, mit mértek.
Hogyan mérik a tisztaságot
A szokásos módszer a HPLC. Az oldott minta egy oszlopon halad át, amely szétválasztja az összetevőit. Egy detektor méri, hogy az egyes összetevők mennyi fényt nyelnek el, általában 214–220 nanométer körüli hullámhosszon, ahol az aminosavak közötti kötés elnyel.
Az eredmény egy kromatogram: egy csúcsokat tartalmazó görbe. A tisztaság a főcsúcs területe osztva az összes csúcs együttes területével. 99%-nál tehát a jel 1%-a valami mástól származik.
Mi ez a „valami más”
A szintetikus peptidek szennyeződései gyakran nagyon hasonlítanak magára a termékre:
- egy aminosavval rövidebb láncok;
- csonka láncok;
- oxidált vagy dezamidált változatok;
- a szintézisből visszamaradt védőcsoportok.
Éppen mert hasonlítanak a termékre, egy kísérletben ők is aktívak lehetnek. Az alacsonyabb tisztaság nagyobb bizonytalanságot jelent azzal kapcsolatban, hogy mi okoz egy mért hatást.
Amit a szám nem árul el
Nem azt, hogy mennyi peptid van a fiolában
A liofilizált por nem csak peptidből áll. Ellenionokat, például acetátot, és kevés kötött vizet is tartalmaz. A tényleges peptid részarányát peptidtartalomnak nevezik, és ez jellemzően 70 és 90 tömegszázalék között van. Egy por tehát lehet 99%-os tisztaságú, és tartalmazhat 80% peptidet. Az egyik szám a peptid összetételét írja le, a másik a poré.
Nem azt, hogy melyik vegyületről van szó
A HPLC azt mutatja, hogy egy fő összetevő van, azt nem, hogy mi ez az összetevő. Ehhez tömegspektrometria szükséges. Ezért tartozik együtt a tisztaság és az azonosság egy analitikai tanúsítványon.
Semmit a sterilitásról vagy az endotoxinról
A kromatogram nem mutatja ki a baktériumokat vagy az endotoxinokat. Ezekhez külön vizsgálatok szükségesek.
Számok összehasonlítása
Az eredmény a módszertől függ. Egy meredek gradiensű rövid futtatás kevésbé jól választ szét, mint egy hosszú, és elrejthet egy szennyeződést a főcsúcs alatt. Ezért csak akkor hasonlítson össze százalékokat, ha ismeri a mérési körülményeket, és nézze meg magát a kromatogramot is.
Mikor számít a 99%
Kvalitatív kísérlethez gyakran elegendő a 95%. Kvantitatív munkánál, például egy sejtmodellben felvett dózis–válasz görbénél vagy egy kötési vizsgálatnál, a lehető legkevesebb zavaró tényezőre van szükség. Ilyenkor a magas tisztaság nem luxus.
A PulseChem esetében egy gyártási tételt ≥99% HPLC-vel meghatározott tisztaság esetén szabadítunk fel. Az Ön gyártási tételére mért érték a tétel tanúsítványán szerepel, amelyet a Laboreredmények oldalon talál. Lásd még a laboratóriumi standardot.
Ez a cikk háttérinformációt nyújt a laboratóriumi kutatáshoz. Nem orvosi tanács és nem használati utasítás. Minden termék kizárólag kutatási célra szolgál.