Næsten alle produktark angiver en renhedsprocent. Tallet er nyttigt, forudsat at du ved, hvad der blev målt.
Sådan måles renhed
Standardmetoden er HPLC. En opløst prøve passerer gennem en kolonne, der adskiller dens komponenter. En detektor måler, hvor meget lys hver komponent absorberer, som regel ved en bølgelængde på ca. 214 til 220 nanometer, hvor bindingen mellem aminosyrer absorberer.
Resultatet er et kromatogram: en linje med toppe. Renheden er arealet af hovedtoppen divideret med arealet af alle toppe tilsammen. Ved 99 % stammer 1 % af signalet altså fra noget andet.
Hvad dette »noget andet« er
Urenheder i et syntetisk peptid ligner ofte selve produktet meget:
- kæder, der mangler én aminosyre;
- afkortede kæder;
- oxiderede eller deamiderede varianter;
- rester af beskyttelsesgrupper fra syntesen.
Netop fordi de ligner produktet, kan de også være aktive i et forsøg. Lavere renhed betyder større usikkerhed om, hvad der forårsager en målt effekt.
Hvad tallet ikke fortæller dig
Ikke hvor meget peptid der er i hætteglasset
Et lyofiliseret pulver består ikke udelukkende af peptid. Det indeholder også modioner, fx acetat, og lidt bundet vand. Andelen af egentligt peptid kaldes peptidindholdet, og den ligger typisk mellem 70 og 90 vægtprocent. Et pulver kan derfor være 99 % rent og indeholde 80 % peptid. Det ene tal beskriver peptidets sammensætning, det andet pulverets.
Ikke hvilket stof det er
HPLC viser, at der er én hovedkomponent, ikke hvad denne komponent er. Det kræver massespektrometri. Derfor hører renhed og identitet sammen på et analysecertifikat.
Intet om sterilitet eller endotoksin
Et kromatogram påviser ikke bakterier eller endotoksiner. Det er separate test.
Sammenligning af tal
Resultatet afhænger af metoden. En kort kørsel med en stejl gradient adskiller dårligere end en lang og kan skjule en urenhed under hovedtoppen. Sammenlign derfor kun procenter, når du kender målebetingelserne, og se på selve kromatogrammet.
Hvornår 99 % betyder noget
Til et kvalitativt forsøg er 95 % ofte nok. Til kvantitativt arbejde, fx en dosis-respons-kurve i en cellemodel eller en bindingsassay, ønsker du så få forstyrrende faktorer som muligt. I så fald er høj renhed ikke en luksus.
Hos PulseChem frigives en batch ved en HPLC-renhed på ≥ 99 %. Den målte værdi for din batch står på dens certifikat, som du finder på siden Analyseresultater. Se også laboratoriestandarden.
Denne artikel giver baggrundsviden om laboratorieforskning. Den er hverken medicinsk rådgivning eller en brugsanvisning. Alle produkter er udelukkende beregnet til forskningsbrug.