Nästan varje produktblad anger en renhet i procent. Siffran är användbar, förutsatt att du vet vad som har mätts.
Hur renhet mäts
Standardmetoden är HPLC. Ett upplöst prov passerar genom en kolonn som separerar dess komponenter. En detektor mäter hur mycket ljus varje komponent absorberar, oftast vid en våglängd på omkring 214 till 220 nanometer, där bindningen mellan aminosyror absorberar.
Resultatet är ett kromatogram: en linje med toppar. Renheten är huvudtoppens area delad med den sammanlagda arean av alla toppar. Vid 99 % kommer alltså 1 % av signalen från något annat.
Vad detta ”något annat” är
Föroreningar i en syntetisk peptid liknar ofta själva produkten mycket:
- kedjor som saknar en aminosyra;
- avkortade kedjor;
- oxiderade eller deamiderade varianter;
- rester av skyddsgrupper från syntesen.
Just eftersom de liknar produkten kan de också vara aktiva i ett experiment. Lägre renhet innebär större osäkerhet om vad som orsakar en uppmätt effekt.
Vad siffran inte säger
Inte hur mycket peptid som finns i vialen
Ett lyofiliserat pulver består inte enbart av peptid. Det innehåller också motjoner, till exempel acetat, och lite bundet vatten. Andelen faktisk peptid kallas peptidinnehållet och ligger typiskt mellan 70 och 90 viktprocent. Ett pulver kan därför ha en renhet på 99 % och innehålla 80 % peptid. Den ena siffran beskriver peptidens sammansättning, den andra pulvrets sammansättning.
Inte vilken substans det är
HPLC visar att det finns en huvudkomponent, inte vad den komponenten är. Det kräver masspektrometri. Därför hör renhet och identitet ihop i ett analyscertifikat.
Ingenting om sterilitet eller endotoxin
Ett kromatogram påvisar inte bakterier eller endotoxiner. Det är separata tester.
Att jämföra siffror
Utfallet beror på metoden. En kort körning med en brant gradient separerar sämre än en lång och kan dölja en förorening under huvudtoppen. Jämför därför bara procentsatser när du känner till mätförhållandena, och titta på själva kromatogrammet.
När 99 % spelar roll
För ett kvalitativt experiment räcker ofta 95 %. För kvantitativt arbete, till exempel en dos-responskurva i en cellmodell eller en bindningsanalys, vill du ha så få störfaktorer som möjligt. Då är hög renhet ingen lyx.
Hos PulseChem frisläpps en batch vid en HPLC-renhet på ≥ 99 %. Det uppmätta värdet för din batch står i dess certifikat, som du hittar på sidan Analysresultat. Se även laboratoriestandarden.
Den här artikeln innehåller bakgrundsinformation om laboratorieforskning. Den är varken medicinsk rådgivning eller bruksanvisning. Alla produkter är endast avsedda för forskningsändamål.