Quasi tutti i peptidi per la ricerca vengono forniti come polvere asciutta in un flaconcino di vetro. Quella polvere è liofilizzata, ossia crioessiccata. Il motivo è semplice: un peptide si deteriora in acqua e quasi per nulla allo stato asciutto.
Che cosa non funziona in soluzione
L’acqua rende possibili alcune reazioni di degradazione:
- Idrolisi. Il legame tra due amminoacidi si rompe e la catena si scinde.
- Ossidazione. Reagiscono con l’ossigeno in particolare metionina, cisteina e triptofano.
- Deamidazione. Asparagina e glutammina perdono un gruppo ammidico, il che modifica la carica del peptide.
- Aggregazione. Le catene si uniscono tra loro e precipitano.
La velocità con cui questo avviene dipende dalla sequenza, dal pH e dalla temperatura. In una polvere asciutta queste reazioni si arrestano quasi del tutto.
La crioessiccazione in tre fasi
- Congelamento. La soluzione del peptide viene congelata. L’acqua diventa ghiaccio.
- Essiccazione primaria. Sotto vuoto il ghiaccio passa direttamente allo stato di vapore senza prima fondere. Questo processo si chiama sublimazione.
- Essiccazione secondaria. La temperatura viene leggermente aumentata per rimuovere l’ultima acqua legata.
Poiché il materiale non è mai liquido e caldo nello stesso momento, la struttura del peptide resta intatta. Ciò che rimane è una torta di liofilizzato leggera e porosa, oppure uno strato sottile sul fondo del flaconcino.
Che aspetto ha la polvere
Pochi milligrammi di peptide sono una quantità molto piccola di materiale. Il flaconcino può sembrare quasi vuoto, oppure la polvere può apparire come una pellicola sottile sul vetro. Durante il trasporto la torta di liofilizzato può anche staccarsi o sbriciolarsi. Nulla di tutto questo dice qualcosa sulla qualità. La quantità e la purezza sono indicate sul certificato di analisi.
Conservazione
Il materiale liofilizzato ha tre nemici: umidità, calore e luce.
- Tenga il flaconcino chiuso, al fresco e al buio. Segua la temperatura di conservazione indicata sull’etichetta.
- Lasci che un flaconcino freddo raggiunga la temperatura ambiente prima di aprirlo. Altrimenti l’umidità dell’aria condensa sulla polvere.
- Eviti ripetuti riscaldamenti e raffreddamenti.
La polvere attira l’acqua. Più breve è il tempo in cui un flaconcino resta aperto, meglio è.
E dopo?
Una volta che un peptide è in soluzione, valgono di nuovo le reazioni di degradazione descritte sopra. Per quanto tempo una soluzione resti utilizzabile dipende dal composto e dal solvente. Annoti nel quaderno di laboratorio quando una soluzione è stata preparata e come è stata conservata, così che le misure possano essere ricostruite in seguito.
Altri termini di questo articolo si trovano nel glossario.
Per un approfondimento sulla conservazione, sulle vie di degradazione dei singoli amminoacidi e sul ricevimento di una spedizione, veda Conservare i peptidi in laboratorio.
Questo articolo fornisce informazioni di contesto sulla ricerca di laboratorio. Non costituisce una consulenza medica né istruzioni per l’uso. Tutti i prodotti sono destinati esclusivamente alla ricerca.